عنوان مقاله	تهيه و تخليص IL-2 از محيط كشت سلولهاي Jurkat
نشریه	مجله دانشكده پزشكي 1383
نویسنده	نوري زاده مريم،حاجتي جمشيد،حسين علي ايزد مريم،موسوي شبستري طاهره
حجم فایل	1022 کیلو بایت
دریافت مقاله

 نقش سايتوكاين ها به عنوان ملكولهاي رابط بين سلولي و تنظيم كننده عملكرد ايمني بدن از مدت ها پيش شناخته شده و IL-2 كه يكي از مهمترين سايتوكاين هاي بدن در تنظيم پاسخهاي ايمني مي باشد، بسيار مورد توجه محققان ايمونولوژي در زمينه هاي آزمايشگاهي و كلينيكي قرار دارد. مواد و روشها: در تحقيق حاضر كه هدف آن، توليد و جداسازي IL-2 مي باشد، از يك رده سلولي انساني T به نام Jurkat كه منبع خوبي براي توليد IL-2 در مقايسه با ساير منابع بوده و مقادير متنابهي از IL-2 را توليد مي نمايد، استفاده شده است. از آنجا كه زمان مناسب تحريك سلول، غلظت مناسب ميتوژن و مدت زمان تحريك سلولها در توليد بهينه IL-2 اهميت دارد، لذا اين سه پارامتر به طور جداگانه مورد ارزيابي قرار گرفتند. پس از آن محيط رويي حاصل از تحريك سلولها به منظور دستيابي به مقادير كافي IL-2 وحذف مواد مداخله گر با استفاده از دستگاه، آميكون تغليظ شده و ميزان کل پروتيين آن سنجيده شد و در نهايت جهت اندازه گيري ميزان IL-2 توليد شده از روش الايزا و به منظور تعيين وزن مولكولي IL-2 بدست آمده از الكتروفورز SDS-PAGE استفاده گرديد. ستون آناليتيكال HPLC با روشReverse phase  نيز جهت تاييد و و تطابق اين مولكول با IL-2 استاندارد به كار گرفته شد. به منظور بررسي فعاليت بيولوژيك IL-2 نيز از روش سنجش بيولوژيك با استفاده از لنفوبلاست هاي انساني استفاده گرديد.يافته ها: نتايج حاصل از ميانگين شمارش سلولها در نمودار (1) نشان مي دهد كه رشد لگاريتمي سلولها از روز دوم آغاز شده و با غلظت اوليه  105 cell/ml در روز سوم به غلظت مطلوب براي تحريك يعني 106مي رسند. مطابق نمودار پيك منحني رشد سلولها در روز پنجم مي باشد. ميزان IL-2 توليد شده تحت تاثير ConA با غلظت 20μg/ml و PMA با غلظت 10ng/ml  و مدت زمان تحريك 22-20 ساعت بيش از ساير موارد مي باشد و در صورت لزوم مي توان به جاي ConA از PHA با غلظت 1g/ml نيز استفاده كرد.نتيجه گيري و توصيه ها: اين مطالعه به دليل استفاده از ساده ترين و كم هزينه ترين روش جداسازي و عدم دسترسي به مقادير زيادي از آنتي بادي مونوكلونال جهت كروماتوگرافي Affinityمقدار IL-2 به دست آمده كمتر از مقادير فوق الذكر مي باشد اما به منظور انجام مراحل تزريق به موش و تهيه آنتي بادي مونوكلونال عليه IL-2 كه از اهداف بعدي اين مطالعه مي باشد كاربرد دارد. از آنجا كه دستيابي به مولكول خالص IL-2 در تهيه كيت هاي تشخيصي از اهميت به سزايي برخوردار است, لذا تهيه مقادير زيادي از محيط كشت رويي سلولهاي تحريك شده و استفاده از روشهاي يك مرحله اي تخليص پس از تغليظ محلول خام توصيه مي شود.